 |
Az egyik ok, amiért úgy gondoljuk, hogy a DNaseI nem emészti meg teljesen a modRNS-vakcinákban lévő DNS-t, az az, hogy az IVT-reakció, amely dsDNS-templátumokból (plazmidokból) modRNS-t állít elő, olyan molekulákat hoz létre, amelyek DNS:RNS hibridek.
Ennek egyik szálán DNS, a másikon RNS található. A DNaseI nem ismeri fel ezeket a molekulákat, és amikor a DNS-sablonhoz komplementer RNS hatalmas feleslegben van, a DNS bázispárba lép az RNS-szel, a komplementer DNS-szál helyett, amely sokkal kisebb mennyiségben van jelen, mint az RNS.
Ezt egy korábbi alcsomagban tárgyaltuk, de eddig mindez csak hipotetikus volt.
A genomika egyik munkalovasa az RNázH nevű enzim, amely az RNáz-Hybridek rövidítése. Ezt az enzimet általában cDNS-könyvtárak készítéséhez használják, mivel az RNS-t törli, miután cDNS szintetizálása RT polimerázból történik.
 |
Mivel gyakran készítünk RNS-Seq könyvtárakat a Hop Latens viroiddal fertőzött kannabisz szekvenálásához, véletlenül volt egy kis ebből az enzimből a fagyasztóban, és egyszerűen alkalmaztam a vakcina mRNS-re, miközben a tisztán körkörös HpLVd RNS-re (Hop Latens Viroid) gyakorolt hatását vizsgáltam.
 |
Ebben a kísérletben egy ssRNS-specifikus festéket használunk, amelyet AccuBlue a Biotiumtól. Ez egy hasonló festék, mint az Invitrogen RiboGreen. A vakcinákban 108-120 ng/ul RNS-t láthatunk a 2ul ez az enzim. A kezelést követően az RNS jel ~50%-kal csökken.
Ha ezt az enzimet tiszta cirkuláris RNS-en (HLVD) és az AccuBlue kvantitációs készletből származó RNS-standardokon használjuk, nem tapasztalunk lényeges változást a jelen lévő RNS mennyiségében. Ez azt jelenti, hogy a vakcinákban lévő RNS nagy része valójában DNS-RNS hibrid, amely ellenáll a DNaseI emésztésnek.
Ez valószínűleg megmagyarázza, hogy a Moderna tételek közül miért van a Vector DNS-hez képest nagyon eltérő mennyiségű Spike DNS-szennyeződés. Ez látható a Speicher et al 5. ábra, ahol a piros vonalak sok Moderna tételben nagyságrendekkel több Spike DNS-t (piros) tartalmaznak a vektor DNS-hez (kék) képest, ahogyan azt a qPCR vizsgálta. A DNaseI körülményeik jobban eltávolítják az RNS-komplementtel nem rendelkező DNS-t. Nem minden Moderna tétel mutatja ezt a viselkedést, és a Pfizer tételek egyike sem mutatja ezt a viselkedést.
 |
Vannak olyan DNázok a piacon, amelyek azt állítják, hogy jobban emésztik a DNS-t a DNS:RNS hibridekben.
Az egyik a NEB által gyártott DNaseI-XT.
 |
Lehetséges, hogy a Moderna és a Pfizer különböző DNázokat használ, hogy megpróbálja jobban eltávolítani a DNS-szennyezést, és ezért látunk különbségeket a Spike/Vektor DNS-szennyezésben egyes tételekben.
Következtetések
A modRNS-vakcinákban nemcsak az EMA és az FDA határértékeit meghaladó dsDNS-szennyeződés van, hanem most már tudjuk, hogy dsRNS-szennyeződés és RNS-DNS-hibridek is vannak. Hogy mi történik, amikor ezt a szennyezőanyag-levest transzfektálják egy sejtbe, azt csak találgatni lehet.
A Kwon-féle cikkből már tudjuk, hogy a citoszolikus DNS-transzfekciók beindíthatják a cGAS-STING-et, és onkogenezishez vezethetnek.
a dsRNS-transzfekciók beindítják az RNSi útvonalat.
A DNS:RNS hibrid transzfekciókat kevésbé tanulmányozták.
 |
Ha hozzáadjuk az N1-metil-Pszeudo U modRNS komplexitását és az általa kiváltott kereteltolódást, akkor valódi fürdőkád gint kapunk, amely precíziós gyógyításnak álcázza magát.
Csak remélni tudjuk, hogy ez nem hagy minket Down with Disease...
egy teljesen átalakított Golgi apparátussal
A hétvégén a Gömbre megyek. Először járok ott. Kívánjatok szerencsét.
Ön jelenleg a Nepetalactone Newsletter ingyenes előfizetője. A teljes élményért
Nincsenek megjegyzések:
Megjegyzés küldése